低剂量甲氨蝶呤给药类风湿性关节炎病人血浆浓度的测定

目的建立一种快速、灵敏地测定类风湿性关节炎病人血浆中低浓度甲氨蝶呤(MTX)的方法。方法采用高效液相色谱(HLPC)串联质谱电喷雾检测(LC/MS/MS)法,色谱柱为Ultimate XB-C18柱,流动相为乙腈(1%甲酸):甲酸铵水溶液(20mmol/L)=30?70,流速为0.2ml/min,柱温为25℃。样品提取采用液-液萃取的方法,即先用三氟乙酸沉淀蛋白,再用乙酸乙酯提取。提取的样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用多反应监测(MRM)对甲氨蝶呤(m/z455.2→308.2)和内标多索茶碱(m/z267.1→181.1)进行测定。结果甲氨蝶呤血药浓度在1～100ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9998),分析方法的最低检测限为0.5ng/ml,其高、中、低(50、10、2ng/ml)3个浓度的平均提取回收率分别为41.2%、49.2%和43.4%,日内(n=5)、日间(n=3)相对标准偏差值(RSD)均<15%。结论本方法简单快捷、灵敏、准确、重现性好,可用于低剂量给药的类风湿性关节炎病人的临床血药浓度监测和药动学研究。