巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因GR1的分离克隆与鉴定

目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因。方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经SalⅠ线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,构建GS115-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMI)技术使GS115-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻遏的GS115-LacZΔ菌体;Southern blot鉴定GS115-LacZΔ基因组,用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序。结果:得到甘油去阻遏的GS115-LacZΔ菌体,经Southern blot分析,突变仅发生在1个基因中;通过质粒拯救和TAIL-PCR,分离得到阻遏相关基因GR1,共2863bp,经在线BLAST,发现其编码一种过氧化物酶体自吞噬相关蛋白。结论:分离得到阻遏相关基因GR1,与过氧化物酶体自吞噬相关,提示过氧化物酶体自吞噬相关基因可能对醇氧化酶启动子AOX1的转录活性有影响。