等温扩增检测耐药基因MECA方法的建立及其临床应用

目的建立环介导的等温扩增快速检测葡萄球菌耐药基因MECA的方法。方法利用包被有SPA单克隆抗体的磁珠富集样品中的金黄色葡萄球菌,快速提取其DNA,用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增金黄色葡萄球菌耐药基因MECA,扩增条件为65°C保温1H。在反应过程中,荧光探针与MECA基因的扩增产物互补序列结合,产生荧光,通过检测反应管中的荧光值来判定结果。结果该方法的最低检测限为10CFU/ML,与M-H培养基苯唑西林药敏试验结果相比较,灵敏性99%,特异性90·9%;而与PCR方法比较,灵敏性100%,特异性100%;试验时间缩短为1H。结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,适用于检测临床标本中的MRSA。