PRRSV GP5蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定

为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组牛痘病毒,本研究通过RT-PCR获得PRRSVCH-1a株GP5蛋白基因,将其克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至转移质粒pSC11中,构建重组转移质粒(pSC11-GP5)。将pSC11-GP5转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,与牛痘病毒进行同源重组。在含有X-gal的琼脂培养基上进行蓝斑筛选,获得了含有PRRSV GP5基因的重组病毒(rWR-PRRSV-GP5)。IFA及动物试验表明,重组病毒表达了PRRSVGP5蛋白,并在免疫小鼠体内诱生了较强的PRRSV抗体。实验表明,该重组病毒所表达的PRRSV GP5蛋白保持了良好的抗原性,为进一步研究PRRSV GP5蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。