S1P1真核表达载体的构建及在HEK293细胞膜上的表达
JOURNAL OF NORTH SICHUAN MEDICAL COLLEGE（2008）
Abstract
目的 构建含人I型1-磷酸鞘氨醇受体(SIPI)-全长cDNA序列及HA和/或EGFP标签的真核表达载体,并观察其在HEK293细胞上的表达.方法 合成2条HA寡核苷酸,克隆人S1P1-Myc-EGFP-N1载体.以HA-S1P1-Myc-EGFP-N1为模板,用PCR的方法 扩增HA-S1P1并克隆人pcDNA3.1(+)载体.限制性酶切消化、PCR、测序的方法 鉴定,载体经Polyfect转染入HEK293细胞.G418筛选出稳定细胞株.用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测S1P1在HEK293细胞上的表达.结果 限制性酶切消化、PCR、测序结果 证实载体构建成功.S1P1表达在HEK293稳定细胞株的表面.结论 成功构建带有HA和/或EGFP标签的S1P1真核表达载体,表面表达S1P1的HEK293稳定细胞株可作为我们进一步研究的细胞模型.
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Key words
eukaryotic expressing vectors,s1p1,cells,surface
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