人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化

目的:探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件.方法:将含有抗Trop-2 Fab抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F’大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响；比较不同诱导温度、诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响；大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性.结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加；16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子；加诱导剂12h,目的蛋白的表达量至峰值.结论:本实验结果为在原核系统 中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础.