徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL。聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPLmRNA在细胞内的表达。结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530bp长的cDNA,完整阅读框大小为1 437bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383。信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%。信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%。成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显。EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分。结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达。