pET32a-AKT1重组质粒的构建与表达

目的：构建重组质粒pET32a-AKT1，利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增AKT1编码区基因，并将其与pET32a质粒融合，并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21（DE3），采用异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western-blot进行蛋白鉴定。结果目的基因与质粒完整融合；重组质粒pET32a-AKT1成功转入菌株DE3；IPTG诱导后，DE3表达相对分子质量为70000的蛋白。结论成功构建重组质粒pET32a-AKT1，且AKT1蛋白在原核表达菌DE3中完整、高效表达。