SEB基因定位突变体构建及其重组表达产物生物学活性研究

目的 构建葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前、后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用突变引物PCR构建SEB基因定位突变体,建立SEB基因及其定位突变体原核表达系统;同时采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的 重组蛋白;采用TCID50法测定目的 重组蛋白对Vero细胞的毒性;采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的 重组蛋白促使小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果 所克隆的SEB基因核苷酸序列与各项研究报道的相似性为100%,3种突变体均在既定位置获得预期的密码子突变.rSEB和各突变体重组蛋白表达量约为细菌总蛋白的40%;rSEB对Vero细胞TCIC50为3.4μg,其突变体重组蛋白分别为3.2～16.8μg;1和5μg/ml的rSEB及突变体重组蛋白rSEB/D9N对小鼠脾细胞均有明显的促增殖作用(P＜0.05),10和20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N促进小鼠脾细胞增殖活性与100μg/ml植物血凝素PHA相似(P＞0.05).5～20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N作用的小鼠脾细胞上清液及其上清液与脾细胞混合物均能有效抑制KB和HL-60细胞生长(P＜0.05).结论 本研究成功构建了SEB基因突变体及其高效原核表达系统;其中突变体重组蛋白rSEB/D9N细胞毒性较低,促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升高白细胞、抗肿瘤的SEB相关药物的候选突变体.