端粒酶抑制剂筛选模型诱饵载体的构建与转化
CHINA TROPICAL MEDICINE（2009）
摘要
目的 构建舍不同人端粒酶RNA基因片段的诱饵融合表达载体并转化酵母,用于酵母三杂交方法筛选端粒酶抑制剂.方法 采用RT-PCR方法从肿瘤细胞中扩增人端粒酶RNA(hTR)基因后,分别扩增hTR基因假结合体区CR4-CR5及H/ACA和CR7区hTR基因片段,纯化分离定向克隆到pRH3诱饵质粒,构建包含不同hTR目的 基因片段的重组质粒,转化大肠杆菌,经PCR、酶切、测序鉴定后,将阳性重组质粒转化酵母菌,进行毒性自激活检验.结果 测序结果证实,含不同hTR基因片段诱饵重组质粒pRH3-hTR构建成功,转化酵母后无毒性和自激活性. 结论成功构建了酵母三杂交系统诱饵载体.可于酵母三杂交系统筛选端粒酶抑制剂及在酵母中研究hTERT和hTR间的相互作用.
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