降解多环芳烃芽孢杆菌NAPZ的萘诱导蛋白研究

对降解多环芳烃的芽孢杆菌Bacillus sp.NAPZ进行了萘诱导蛋白的研究,以揭示此类细菌参与萘降解的关键蛋白组分及可能的降解机制。将NAPZ活化、培养、镜检,测量其在600 nm处的吸光值绘制生长曲线,选择指数生长期对NAPZ进行萘诱导,在特定时间收集菌体,浓缩后进行超声破碎,使蛋白释放,样品进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,之后对电泳结果进行分析。形态学观察表明,NAPZ为杆状细菌,革兰氏染色结果呈阳性,产芽孢。生长曲线显示培养8h时细菌进入指数生长期,12 h时生长速率最大。对菌体破碎研究表明,超声破碎5 min(55 w,超声5 s,间隔10 s)效果较好。SDS-PAGE电泳结果显示,与对照相比,诱导培养12 h的NAPZ蛋白样品中12-1(Mr约53 000)、12-2(Mr约51000)、12-4(Mr约36 000)有明显表达量升高,另外出现一新增条带12-3(Mr约38 000),其相对分子质量大小与诱导型龙胆酸双加氧酶一致,推测该菌可能通过龙胆酸途径降解萘,而不同于一般革兰氏阴性细菌的邻苯二酚途径。本研究对降萘芽孢杆菌NAPZ进行了生长曲线的测定和超声破壁条件的研究,并发现了诱导及非诱导条件下NAPZ蛋白表达量差异,初步推测高表达蛋白及新增蛋白与菌株对萘的降解利用有关。