等位基因特异性PCR法快速检测结核分枝杆菌常见耐药突变基因

目的建立一套同步检测结核分枝杆菌(MTB)常见耐药突变基因的等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测体系,以间接判断对利福平(RFP)与异烟肼(INH)的耐药性。方法用AS-PCR技术同步检测58株MTB临床分离株rpoB基因516位、526位和531位,katG基因315位及inhA基因-15位密码子突变,并与DNA测序结果进行比对。结果 AS-PCR法对RFP耐药株检出率为95.1%(39/41),其中rpoB基因531位、526位、516位点突变分别检出28株、10株、2株,包括531位与526位联合点突变1株;未检出突变的2株RFP耐药株经测序验证1株未发生突变、1株发生533位点突变;RFP敏感株均未检测到突变。AS-PCR法对INH耐药株检出率为86.5%(45/52),其中katG基因315位点突变43株、inhA基因-15位点突变2株,未检出突变的7株INH耐药株经测序验证未见突变;INH敏感株均未检测到突变。结论等位基因特异性PCR能够快速检测MTB常见突变基因,具有较高的敏感性与特异性,快速经济、操作简便。