刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析

目的 对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性.结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果 表明,目的 基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达.重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别.结论 RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原.