细胞培养结合实时荧光RT-PCR法快速检测7型腺病毒感染

目的 建立一种细胞培养与实时荧光RT-PCR相结合的检测7型腺病毒(ADV7)感染的技术.方法 A549细胞分离培养鼻咽分泌物中的腺病毒纯化后,以感染复数(MOI)为0.1、0.5、5.0和10.0的纯化病毒感染A549细胞,分别在感染后3、6、12和24 h提取总RNA进行ADV7 E1A基因的实时荧光RT-PCR检测并测序验证;最后用该法直接检测鼻咽分泌物标本中的7型腺病毒.结果 实时荧光RT-PCR最快可在感染后3 h检测出0.5MOI病毒感染的早期转录物;感染后6 h可检测出0.1 MOI病毒感染的早期转录物;鼻咽分泌物标本直接感染后6 h即可检测到病毒的早期转录物.结论 细胞培养结合实时荧光RT-PCR法能快速、灵敏、特异地检测出感染性的7型腺病毒,具有一定的推广应用价值.