吴茱萸碱与吴茱萸次碱经PXR、CAR核受体通路影响CYP3A4表达的研究

目的:研究吴茱萸碱与吴茱萸次碱能否通过孕烷X受体(PXR)、组成型雄甾烷受体(CAR)通路转录调节CYP3A4的活性。方法:PXR表达质粒与CYP3A4报告质粒、CAR表达质粒与CYP3A4报告质粒瞬时转染到LS174T细胞后,分别给予2.5、10、40μmol/L浓度的吴茱萸碱与吴茱萸次碱,采用报告基因检测CYP3A4荧光素酶活性;采用二步灌流法分离小鼠原代肝细胞,给予2.5、10、40μmol/L浓度的吴茱萸碱与吴茱萸次碱,采用实时荧光定量链式聚合酶反应(R-PCR)与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测小鼠原代肝细胞中CYP3A11基因表达和酶活性。结果:在10、40μmol/L浓度下,吴茱萸碱经PXR核受体通路使CYP3A4报告基因荧光素酶活性分别增加至3.41、4.15倍;10、40μmol/L浓度下吴茱萸次碱能使利福平对PXR的诱导作用减少,分别降低37.7%、45.34%,吴茱萸次碱能使CAR阳性药物CITCO对CAR的诱导作用减少29%。10、40μmol/L浓度下吴茱萸碱能使CYP3A11 mRNA表达分别增加至2.67、3.80倍;40μmol/L浓度下吴茱萸次碱能下调原代小鼠肝细胞中35%的CYP3A11 mRNA表达。10、40μmol/L浓度下吴茱萸碱能显著增加CYP3A11酶功能活性分别至3.63、3.01倍;吴茱萸次碱在40μmol/L浓度下能显著减少34.54%CYP3A11酶功能活性。结论:吴茱萸碱能通过PXR核受体通路诱导CYP3A4荧光素酶、mRNA表达及酶活性,吴茱萸次碱能通过PXR、CAR通路共同抑制CYP3A4荧光素酶、mRNA表达及酶活性。