检测日本血吸虫感染性钉螺环介导等温扩增方法的建立

为建立检测日本血吸虫感染性钉螺的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,利用PrimerExplorer V3软件设计4条扩增血吸虫尾蚴钙结合蛋白基因的LAMP引物,酚氯仿法提取血吸虫感染性钉螺、阴性钉螺及肝吸虫感染豆螺基因组DNA进行LAMP反应,LAMP产物经显色、电泳、酶切及DNA序列分析鉴定。在100个阴性钉螺中分别加入20、10、8、6、4、2、1个阳性钉螺,提取DNA后进行LAMP扩增来检测该法的群体检测效果。结果显示,感染性钉螺检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组呈棕色(阴性);感染性钉螺LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,阴性钉螺及感染肝吸虫豆螺无扩增产物;酶切及序列分析结果显示扩增产物为目的基因;LAMP可检测到100个阴性钉螺中含有阳性钉螺的最低数为2。结果表明,检测日本血吸虫感染性钉螺的LAMP方法特异、简便及具有较好的群体检测效果。