乙脑病毒prME蛋白与鼠GM-CSF编码基因的融合构建与表达

目的构建乙脑病毒prME蛋白与鼠GM-CSF融合基因重组子并建立稳定细胞表达株。方法套式-RT-PCR法从BALB/c鼠脾组织获取GM-CSF编码基因,用限制性内切酶从含乙脑病毒prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因,定向克隆至同一真核表达载体pcDNA3.1(+)不同酶切位点,构建重组子pJME/GM-CSF并经酶切及DNA测序分析。脂质体法将pJME/GM-CSF转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞。Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白表达。结果 pJME/GM-CSF经BamH I/EcoRI和BamH I/Not I酶切释出的插入子片段(2001 bp、2472bp)分别与预期结果相符合。所编码的融合蛋白相对分子量(Mr)为85×103。结论 pJME/GM-CSF成功构建,转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白。