环介导等温扩增技术（LAMP）检测棘球绦虫感染犬粪DNA的研究Ⅱ

目的：为有效地控制预防流行区犬科动物的棘球绦虫感染情况，建立一种快速检测棘球绦虫感染犬的粪便DNA检测方法-环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification ．LAMP）。方法针对细粒棘球绦虫线粒体DNA ND2基因6个位点特异性的设计4条LAMP引物，利用LAMP法和普通PCR方法同时检测棘球绦虫、肥胖带绦虫以及犬肠道内的其它寄生虫DNA来验证LAMP方法的特异性；将转入ND2基因片段的质粒作为标准阳性对照，并做梯度稀释后同时用 LAMP和 PCR方法进行检测比较两者的敏感性。此外，将采集的46份犬粪便标本提取DNA ，分别运用LAMP和犬尸体剖检进行感染犬的初步检测评估。结果 E ．g mtDNA ND2基因的LAMP引物能够鉴别多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫这两个相近的种属，并不与其它待检寄生虫发生交叉反应，且最低检测限度为4×101拷贝（灵敏度比普通PCR高出103倍）。在初步对46份犬粪便DNA检测结果中 ND2 LAMP引物显示出较好的灵敏度和特异度，χ2检验结果该方法与犬尸体剖检方法的诊断效果无统计学差异。结论本研究初步建立了LAM P技术检测细粒棘球绦虫感染犬的新方法，在各项特异度、灵敏度和样本检测中展现出较好的效果。该方法不需要昂贵的仪器设备和繁琐的电泳分析过程，有望成为流行区和基层兽医站细粒棘球绦虫感染犬检测的新方法。