高迁移率族蛋白1在大肠埃希菌中的高效表达以及纯化

目的 克隆、表达高迁移率族蛋白1(HMGB1).方法 从人外周血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得HMGB1基因;将该基因克隆到PMD18-T载体中,测序鉴定;将HMGB1基因插入pET32-A表达载体中,30℃诱导表达4h,进行SDS-PAGE分析;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化后用Western-Blot证实.结果 DNA测序证明,获得了HMGB1基因,其序列与Gen Bank中报道序列完全一致;SDS-PAGE分析表明,HMGB1蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的32%;诱导表达产物主要以包涵体形式存在,6 His-NTA纯化后获得目的 蛋白,Western-Blot结果 显示纯化蛋白具有良好的抗原性.结论 成功表达和纯化了HMGB1基因.