小鼠供体嵌合率定量检测方法的建立及评价

本研究探讨建立小鼠供体嵌合率(DC)定量检测方法的有效性。模拟小鼠单倍体相合造血干细胞移植模型,以雄性C57BL/6为供鼠,雌性CB6F1小鼠为受鼠,受鼠随机分成两组,分别给予2Gy与6Gy的60Coγ照射,随后接种供鼠骨髓(BMCs)及脾细胞悬液(SPMNCs)。移植后利用流式细胞术及real-time PCR技术定量检测DC。结果表明:两种方法检测移植后DC时各有优缺点。6Gy组小鼠在移植后DC数>90%、且此状况稳定存在3月以上,采用FCM法检测效果较好;2Gy组小鼠移植后DC数<10%,随后以不同水平的微嵌合体存在直至消失,则宜选用realtime-PCR法检测。结论:流式细胞术检测供体大嵌合准确性高,但当DC数<1%时灵敏度差;realtime-PCR法的灵敏度可检测出微嵌合体,但在检测大嵌合体时精确性差。两种方法互补运用则灵敏度高,精确性强,因此可作为小鼠移植与过继免疫治疗模型中定量检测DC的最佳方法。