肝细胞生长因子基因转移预防术后肠黏连的实验研究

目的观察质粒DNA在大鼠术后肠黏连模型中的表达效率及肝细胞生长因子(HGF)基因转移对术后肠黏连的预防作用。方法以pcDNA3-HGF转染CHO细胞24h后收集培养上清,用ELISA测定培养上清中HGF的浓度;取培养的大鼠腹膜间皮细胞作划痕试验,观察表达HGF的培养上清对间皮细胞迁移的影响。利用无菌干纱布擦伤盲肠的方法建立Wistar大鼠术后肠黏连模型,将模型大鼠随机分为5组,每组10只。其中4组分别于创面涂布pcDNA3-HGF10、50、100和200μg,1组于创面涂布绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pcDNA3-GFP200μg作为对照。术后第2、14天分别解剖pcDNA3-GFP200μg组大鼠各2只取腹膜组织,荧光显微镜下观察GFP的表达;术后第14天解剖各组动物,观察肠黏连的发生情况。结果pcDNA3-HGF质粒转染CHO细胞后24h培养上清的HGF浓度达40ng/ml,该上清能够促进大鼠腹膜间皮细胞的迁移。pcDNA3-GFP200μg组大鼠术后第2天腹膜组织中观察到GFP的表达,并持续到术后第14天。术后第14天各组大鼠中均有发生不同程度肠黏连者,pcDNA3-HGF10、50、100和200μg组和pcDNA3-GFP200μg组大鼠肠黏连发生率分别为9/10、7/10、6/10、4/10和9/10,其中重度(3~4度)肠黏连发生率分别为5/10、5/10、2/10、3/10、7/10,pcDNA3-HGF对术后肠黏连的预防效果呈一定的量效关系。结论质粒DNA能有效转染损伤腹膜并介导外源基因表达;质粒载体介导HGF基因转移是预防术后肠黏连的有效手段。