杨树基因组SRAP扩增体系的建立与优化

以响叶杨和银白杨及F1代为实验材料,利用正交设计直观分析法和单因素随机试验对杨树SRAP反应体系中各组分(TaqDNA聚合酶、dNTP、引物和Mg2+)的浓度进行优化;通过实验确定10μL反应体系为:引物0.35μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,dNTP0.2mmol/L,Mg2+2.0mmol/L,10×PCRbuffer1μL,模板DNA1μl(20ng/μL)。同时利用最佳反应体系以及正交设计直观分析法对PCR扩增程序进行筛选,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结果表明最佳反应程序为:开始94℃变性5min,反应前5个循环在94℃1min,37℃30s,72℃1min条件下运行;之后35个循环在94℃1min,54℃1min,72℃1min条件下运行,最后延伸7min;12℃保存。并利用两树种的杂种F1代对优化的反应体系和程序的可行性进行了验证。