外源性Wnt-3a促进急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与细胞周期进展

目的应用重组腺病毒介导的Wnt-3a激活急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat中的经典Wnt/β-catenin信号途径,观察该途径激活后对Jurkat细胞增殖及细胞周期的影响,初步探讨其在急性T淋巴细胞白血病分子发病机制中的作用。方法将携带Wnt-3a基因的重组腺病毒(Ad5-Wnt-3a)感染Jurkat细胞,实验分为3组:实验组(Jurkat/Ad5-Wnt-3a)、空载体组(Jurkat/Ad5-GFP)和空白对照组(Jurkat)。转染后,采用RT-PCR方法检测Jurkat细胞内Wnt-3amRNA的表达;Westernblot检测细胞内β-catenin蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖,FCM法检测细胞周期,RT-PCR检测Wnt信号通路下游靶基因c-myc和cyclinD1mRNA表达。结果重组腺病毒Ad5-Wnt-3a转染Jurkat细胞后48h,实验组有效表达Wnt-3a的基因。Westernblot结果显示,与对照组比较,实验组细胞内β-catenin蛋白表达明显增加(P<0.05)。MTT结果显示,Wnt-3a转染后48h和72h可明显促进Jurkat细胞的增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测发现,Wnt-3a转染后可引起细胞G0/G1期下降,S期升高(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示细胞内c-myc和cyclinD1mRNA表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导的Wnt-3a可以激活Jurkat细胞中的经典Wnt/β-catenin信号途径,使Jurkat细胞增殖,促进细胞周期进展,其可能的机制是通过调控其下游靶基因c-myc和cyclinD1的表达实现。