A族链球菌类胶原样蛋白Scl1的原核表达及纯化

目的构建A族链球菌Scl1的重组体并进行原核表达及表达蛋白的纯化,为进一步研究该蛋白的空间结构及其与A族链球菌所引起的多种疾病之间的关系奠定基础。方法根据A族链球菌M1型国际标准菌株SF370基因组设计Scl1基因扩增引物,通过聚合酶链反应(PCR)获得Scl1目的基因,与原核表达载体pet28a分别通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后进行连接,构建重组质粒Scl1-pet28a,并进行序列测定,与原序列比对确定序列的一致性。将Scl1-pet28a转入E.coli BL21中,用IPTG诱导后经MALDI-TOF-MSMS质谱鉴定Scl1的表达,用AKTA全自动蛋白纯化系统对表达蛋白进行纯化。结果获得序列正确的Scl1基因及原核重组表达质粒Scl1-pet28a,MALDI-TOF-MSMS证实重组质粒能够在E.coli BL21中表达,纯化的表达产物为分子质量单位约50ku的单一Scl1蛋白。结论成功构建了Scl1原核表达载体,在E.coli中表达出目的蛋白并获得纯化蛋白Scl1。