高效抑制小鼠精子zfx基因shRNA分子的筛选

zfx是小鼠X性染色体上的特异基因,可能与X精子的发生有关,沉默或下调该基因的正常表达可影响X精子的正常发育,使后代性别比列发生偏移。本实验为了筛选对小鼠zfx基因有效的shRNA分子,利用RNAi技术针对X精子zfx基因组mRNA的不同外显子选取10个干扰靶位,成功构建了10个shRNA质粒表达载体;通过对体外培养的生精细胞zfx基因的干扰试验,并用qRT-PCR方法检测生精细胞中zfx mRNA的表达丰度。结果显示:有4个干扰质粒组对zfx基因表达抑制明显,抑制率为33.47%~92.61%,其中pqz1、pqz3和pqz4等3个表达质粒抑制效果最好,抑制率分别为70.1%(P<0.05)、85%(P<0.05)和92.61%(P<0.01),表明这3个质粒能明显抑制小鼠生精细胞中zfx基因的表达。