六成汤含药血清抗MRC-5衰老的分子机制研究

目的:探讨六成汤抗MRC-5细胞衰老的分子机制。方法:制备六成汤的含药血清作用于MRC-5细胞,用80 g.L-1的D-半乳糖制备衰老模型,用同体积生理盐水做对照。用MTT法做预实验,筛查最佳实验条件:空白血清对照组,模型组,10%含药血清、8%含药血清、6%含药血清、4%含药血清、2%含药血清组(含药血清用空白血清稀释),分别作用24 h、48 h、72 h。正式实验根据预实验结果进行分组造模后收集细胞,用流式细胞计数法检测细胞周期及细胞凋亡情况;用Western-blot方法检测衰老相关bax、bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况。结果:预实验中六成汤含药血清作用48 h、浓度为4%时效果最好。根据预实验结果,正式实验分为对照组,模型组,高(8%含药血清)、中(4%含药血清)、低(2%含药血清)剂量组,含药血清作用48 h。流式细胞计数法显示与模型组相比,各组G1期细胞减少,S期细胞增多,凋亡率降低;Western-blot法显示促凋亡蛋白caspase3、bax表达减少,抑凋亡蛋白bcl-2表达增加,中剂量组变化最明显。结论:六成汤含药血清可能通过减少衰老细胞的G1期阻滞,调节细胞周期及凋亡相关蛋白表达,减少细胞凋亡来发挥抗衰老作用。