利用反向遗传学技术研究脊髓灰质炎病毒/柯萨奇病毒嵌合基因组的生物学特性

为探讨B_3型柯萨奇病毒(CVB_3)P_2基因区能否在功能上取代Ⅰ型脊髓灰质炎病毒(PV_1)的P_2基因区,构建包含PV_1/CVB_3嵌合体cDNA的真核表达质粒,其中PV_1的P_2基因区被来自于CVB_3的P_2基因区所代替.质粒转染真核细胞KMB-17后,导致了细胞病变效应,电镜观察到转染细胞的超微结构发生了改变并形成了病毒样颗粒(VLP).免疫电镜进一步证实了这些颗粒的存在.RT-PCR及中和实验结果表明质粒携带的外源基因发生转录并合成了病毒蛋白.蔗糖密度梯度离心和液闪仪计数实验显示转染细胞内标记蛋白的动态变化过程与脊髓灰质炎病毒疫苗株在正常细胞内的复制和装配过程类似.上述工作为进一步深入研究肠道病毒非结构蛋白在重组病毒的形成中所发挥的生物学作用奠定了基础.