溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法作为皮肤致敏试验替代方法研究

目的探讨应用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)示踪和酶联免疫吸附测定(ELISA)的局部淋巴结试验(LLNA:Br-dU-ELISA法)替代LLNA(放射法)作为皮肤变态反应试验替代方法的可行性。方法雌性BALB/c小鼠随机分组,每组4只。选择27种受试物进行测试,每种受试物视情况设3～4个剂量组和1个溶剂对照组。将受试物连续3 d涂抹于小鼠双耳背,第5天腹腔注射BrdU标记液,第6天摘取小鼠耳部淋巴结,制备淋巴细胞悬液,采用ELISA技术测定BrdU掺入细胞的水平。选择3种受试物进行3次重复性试验以了解结果的重现性;将27种受试物的LLNA:BrdU-ELISA法与文献报告的LLNA(放射法)结果比较,分析方法的致敏性判别能力及分级结果的一致性和相关性。结果 LLNA:Br-dU-ELISA法结果重现性较好(F=2.890,P>0.05);与LLNA(放射法)相比,该方法对27种化学物的致敏性判别能力较好(灵敏度=95.00%,特异度=85.71%,符合率=92.59%),致敏性分级结果有较好的一致性和相关性(Kappa=0.575,Gamma=0.959)。结论 LLNA:BrdU-ELISA法可作为皮肤变态反应试验的替代方法应用于化学物皮肤致敏性评价。