重组表达人乙酰胆碱受体α1亚基胞外域蛋白

目的 获得大量正确折叠的重组人乙酰胆碱受体(AChR)αl亚基N末端胞外域(ECD)蛋白.方法 用RT-PCR方法从TE671细胞中扩增出AChR αl亚基全序列,在此基础上再扩增出ECD基因序列并将其插入到原核表达载体pET16b.以构建的新载体转化E.coli BL21(DE3)pLysS,培养物以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过SDS-PAGE比较诱导前后蛋白表达情况.重组蛋白以Ni2+亲和层析纯化.蛋白透析复性后,以ELISA法检测活性.结果 PCR产物大小为650 bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实ECD核苷酸序列正确,并正确插入载体pET16b.诱导所产生的大量包涵体蛋白经复性后正确折叠且具活性.结论 可通过原核表达获得大量正确折叠的可溶性重组人肌肉AChR al亚基ECD蛋白.