短发夹RNA缄默survivin基因对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨survivin短发夹RNA (shRNA)表达质粒对白血病细胞株体外生长和凋亡的影响.方法 酶切法构建干扰survivin基因表达的重组质粒和阴性对照质粒,电击转染质粒入Jurkat细胞.实验分为未转染组、无功能shRNA组(阴性对照组)及重组质粒组.分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织细胞化学染色法检测各组细胞中survivin mRNA、蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞的生长抑制率,流式细胞仪计数(FCM)测定各组细胞凋亡率.结果 DNA测序证实survivin短发夹RNA表达质粒和阴性对照质粒构建成功.重组质粒组与未转染组及无功能shRNA组比较,RT-PCR结果显示转染后重组质粒转染组survivin基因表达相对于未转染组及阴性对照组显著下降(Pа0.05);免疫组织细胞化学染色结果显示重组质粒转染组survivin蛋白表达相对于未转染组及阴性对照组显著下降;MTT显示重组质粒生长抑制率为(24.65±1.10)%,而未处理组为(2.04±0.16)%,阴性质粒组为(2.17±0.15)%;FCM结果示未转染组细胞凋亡率为(2.13±0.42)%,阴性质粒组凋亡率为(2.55±0.95)%,重组质粒转染组细胞凋亡率为(11.48±1.11)%.shRNA重组质粒介导的RNA干扰抑制survivin表达,抑制Jurkat细胞生长和促进其凋亡(P<0.05).结论 靶向为survivin基因的RNA干扰技术可为儿童白血病治疗提供新的手段.