人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性

目的 构建人Cu, Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性.方法 根据酵母密码子偏好性,合成人Cu, Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115.甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性.结果 经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的 蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的 蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定.结论 在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu, Zn-SOD基因.