CRH促进大鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌及其受体途径

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对大鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响及其受体途径。方法将原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞分为对照组、CRH组、CRH受体(CRHR)1选择性阻断剂CP-154526+CRH组(简称CP+CRH组)、CRHR1/2非选择性阻断剂α-helical CRH9-41+CRH组(简称HL+CRH组)以及蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89+CRH组(简称H89+CRH组)5组。对照组仅加入新鲜RPMI1640培养液2 mL培养;CRH处理组加入1×10~(-9) mol/L CRH培养液2 mL;后3组分别加入含CP-154526(5×10~(-4) mol/L)、α-helical CRH9-41(1×10~(-6) mol/L)以及H89(1×10~(-6) mol/L)培养基预孵育2 h,然后加入CRH使培养液CRH终浓度为1×10~(-9) mol/L。各组分别于CRH刺激后0.5、1、2、4、8 h收集培养皿中上清液,应用ELISA法检测IL-6水平。结果对照组巨噬细胞分泌IL-6维持在低水平。CRH组巨噬细胞分泌IL-6在2 h时增加,达(7.7±0.741)μg/g prot,高于同一时点的对照组(P<0.05),4 h时达高峰[(16.60±3.94)μg/gprot],接近同时相点对照组的3倍(P<0.01)。CP+CRH组巨噬细胞IL-6分泌量在2、4 h时下降非常显著,与同时点CRH组比较分别下降约88%、92%(P<0.01),低于同时点对照组(P<0.01)。H89+CRH组中巨噬细胞分泌IL-6在2、4 h显著下降(P<0.01),其抑制效应约66%～79%。结论 CRH可通过CRHR1激活巨噬细胞促进IL6分泌,与细胞内PKA信号密切相关。CRH在激活巨噬细胞的过程中可能起到允许和易化作用。