小鼠Bax的基因克隆及其原核表达

目的克隆小鼠Bax基因全长编码区,并原核表达小鼠Bax基因全长序列,为从转录水平探讨Bax基因与肿瘤的关系奠定基础。方法取小鼠骨髓细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从细胞中获得Bax基因,构建重组表达质粒pet28a/Bax;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后经IPTG 25℃诱导6h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,Western blot鉴定。结果扩增获得的Bax基因CDS区全长579 bp,编码192个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。成功构建了原核表达载体pet28a/Bax,并在工程菌ROS中获得大量表达。结论获得了小鼠Bax基因,并成功原核表达和制备出小鼠Bax融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础,并为寻找多种肿瘤性疾病的有效治疗途径提供新思路。