大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

[目的]建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础.[方法]以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化.[结果]提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8～2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求.在25.0μLISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为:40 ng/μI模板DNA 1.0μL、2.5 mmol/L dTPs 2.0μL、5 U/μL TaqNA聚合酶0.2μL、10 μmol/L引物1.0μL、10×PCR Buffer 2.5μL(含有Mg2+),加ddH2O至25.0 μL.PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,52℃和53℃退火40 s,72℃延伸90s,40个循环;最后72℃延伸7 min.由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱.[结论]建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性.