人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定
World Chinese Journal of Digestology(2006)
摘要
目的:建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/5- FU及并对其耐药机制进行探讨.方法:先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用,历时7mo,至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2.0mg/L的细胞培养液中稳定生长.电镜、HE染色观察2种细胞形态结构差异.体外细胞毒性实验观察他对5-FU ADM,DDP的耐药性.绘制亲本细胞和耐药细胞的体外生长曲线.罗丹明染色法检测其两种细胞P-gp功能表达.结果:HCT-8细胞株经7mo诱导,可在5-FU 2.0 g/L的培养液中稳定增殖,具有多药耐药性,命名为HCT-8/5-FU,该细胞株对5-FU的耐药指数为16.6,并对ADM,DDP有交叉耐药性.该细胞株体外群体倍增时间与亲本细胞差别不显著.HE染色观察耐药细胞胞体较亲本细胞大,细胞核不规则,可见双核、多形核,细胞形态不规则,呈多角形、细长形改变,可见巨核细胞.透射电镜下耐药细胞胞质内线粒体、内质网、溶酶体增多.流式细胞仪罗丹明染色法观察荧光强度曲线左移,提示耐药细胞有过度P-gp表达.结论:成功建立HCT-8/5-FU多药耐药细胞株.先采用较大剂量间歇诱导进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用是诱导大肠癌耐药细胞株的较好方式.HCT-8/5-FU细胞株的耐药机制与P-糖蛋白表达有关.
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关键词
Tumor cell,P-glycoprotein,Colorectal cancer,Multidrug resistance,Cell culture,Drug-resistant cell line
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