酶消化差速贴壁法分离培养老年ED大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的研究

目的探索培养老年勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(SMC s)生物学特性稳定、细胞纯度高、简单易行的一种新方法。方法电生理仪检测24月龄雄性大鼠阴茎海绵体压力和平均动脉压比值(ICP/MAP)来评价阴茎勃起功能,从而选择老年ED大鼠。分别采用组织块法、酶消化法和酶消化差速贴壁法分离培养24月龄ED大鼠SMCs;采用存活率、生长曲线、相差显微镜和HE染色等,比较不同方法培养SMCs的生物学特性;免疫组化、免疫荧光和流式细胞仪通过检测α-SM-actin、Myosin和Desmin的阳性率来鉴定SMCs,并比较不同方法培养SMCs的纯度。结果 ICP/MAP低于0.45入选老年ED大鼠组。细胞存活率提示酶消化法和组织块法存活率分别为93%和90%,酶消化差速贴壁法显著增加到99%(P<0.05);生长曲线提示酶消化差速贴壁法细胞数量在第5～7天也显著增加(P<0.05);酶消化差速贴壁法培养细胞在相差显微镜和HE染色下形态基本一致,呈梭形生长。免疫组化、免疫荧光和流式鉴定是SMCs,组织块法和酶消化法原代培养的SMCs纯度平均分别为45%和82%,酶消化差速贴壁法SMCs纯度显著增加到98%(P<0.05)。α-SM-act|in、Myosin和Desmin在SMCs中有大量表达,在11代以内SMCs纯度维持较高水平(95%以上)。结论酶消化差速贴壁法快速简便,可在一定范围内提高SMCs纯度;用此法培养的SMC s,生物学特性稳定,细胞纯度高,为建立SMC s细胞株奠定基础。