潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达

从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒(Turnip m osaic virus,TuMV)分离物(TuMV-Ra),通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP)基因,对其进行了序列测定,并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明,TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9%~99.0%,CP氨基酸序列同源性为94.8%~99.7%;其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高,核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0%,氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CH INA-WFCP基因核苷酸同源性为93.66%,氨基酸同源性为96.53%,说明病毒发生了比较大的变异,而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-RaCP基因克隆到原核表达载体pET-22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。W estern b lotting分析证明TuMV-RaCP在大肠杆菌中得到了正确表达。