疏水性ELP基因设计与基因库构建

【目的】设计合成疏水性类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)基因,建立ELP基因库。【方法】选择疏水性最强的异亮氨酸(Ile,I)(疏水参数:4.5)取代ELP五肽重复序列单元(缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-客座氨基酸-甘氨酸,VPGXG)中客座残基X。全基因合成一段含编码(VPGIG)10序列,上游含DraⅢ酶切位点、下游含BglⅠ酶切位点的ELP单元。将DraⅢ和BglⅠ设计为一对同尾酶(Isocaudarner),利用这对同尾酶定向克隆(Recursive directional ligation,RDL)一系列不同拷贝数的ELP基因。为鉴定基因库有效性,随机选取库中ELP[I]50基因进行蛋白表达、纯化并测定其相变温度(Inverse temperaturetransition,Tt)。【结果】建立了ELP[I]n(n=10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120)基因库。测定ELP[I]50的Tt为24.3°C。【结论】首次单独选用Ile(I)作为ELP蛋白质标签中客座残基氨基酸,增加了ELP中疏水性氨基酸的含量,为进一步筛选出表达量高、Tt低、分子量小的ELP标签奠定基础。