Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用

小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.