鲫鱼淋巴细胞转化PHA刺激剂量及流式细胞仪检测参数探讨

从异育银鲫外周血中分离淋巴细胞,利用RPM I-1640培养基培养48 h后,采用流式细胞仪分析方法研究不同浓度的植物凝集素(phytohem agglutin in,PHA)(0μg/mL、80μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1 000μg/mL、1 200μg/mL)对外周血淋巴细胞转化率的影响,旨在探索异育银鲫外周血淋巴细胞体外转化最适刺激剂量。结果表明:(1)在PHA浓度0~400μg/mL的范围内,随着PHA浓度的增加,淋巴细胞转化率也增加,呈浓度依赖的关系,但当PHA的浓度增加到1 200μg/mL,淋巴细胞转化率明显下降。其中PHA浓度为400μg/mL时,淋巴细胞转化率最高,显著高于低浓度组(80μg/mL)和高浓度组(1000μg/mL、1200μg/mL)(P<0.05),略高于中浓度组(200μg/mL、600μg/mL、800μg/mL),差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下,PHA体外刺激异育银鲫淋巴细胞转化的最适剂量为400μg/mL。(2)用流式细胞仪检测细胞内DNA合成情况,Mu lticyc le AV软件进行细胞周期分析,通过DNA增殖指数测定淋巴细胞转化率是一种简单、可靠的方法。需要注意的是,采用流式细胞仪测定鲫鱼淋巴细胞转化率时,FS/SS参数设置为FS:Volts 62-gain 100;SS:Volts 1000-gain 500能够获得清晰的图像。