SD大鼠超排及TALEN质粒显微注射构建基因敲除大鼠

目的应用TALEN技术构建基因敲除大鼠,并探讨SD大鼠超数排卵、显微注射浓度、胚胎移植方式对构建大鼠出生率、阳性率的影响。方法将SD雌鼠超数排卵后,取受精卵显微注射由TALEN质粒体外转录成的mRNA,注射后存活的受精卵输卵管移植,观察大鼠的出生率,并测序判定出生大鼠的基因敲除阳性率。结果 4~5周和5~6周的雌鼠超数排卵见栓率[(74±9)%vs(77±6%)%]、取卵数量[(25±2)枚vs(23±2)枚]以及卵的受精率[(85±2)%vs(93±2)%]差异均无统计学意义(P>0.05);结扎公鼠和受体雌鼠在8~10周时见栓率最高[(23.02±5.26%)%],使用12周后见栓率明显下降[(11.66±2.40)%];单侧和双侧输卵管移植大鼠出生率差异无统计学意义(37.88%vs 36.49%),但单侧移植大鼠存活率高于双侧移植(37.88%vs 20.27%,P<0.05),且单细胞移植大鼠出生率显著高于双细胞移植。质粒注射浓度在20 ng/μl组大鼠基因敲除阳性率最高(7.5%)。结论应用TALEN技术成功构建基因敲除大鼠,显微注射质粒浓度20 ng/μl时大鼠出生率不受影响且基因敲除阳性率最高。