猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
China Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2012）
Abstract
本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针.PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性；与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2.
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Key words
standard curve,TaqMan probe,porcine circovirus type 2,fluorescent quantitative PCR
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