甜菜夜蛾核多角体病毒SeMNPV egt基因的克隆及序列分析

甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)是对甜菜夜蛾专性的杆状病毒。egt基因是杆状病毒非必需的早期基因,它编码一种叫做蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyl-transferase,EGT)的多肽。采用了SDS-蛋白酶K-饱和苯酚的方法进行SeMNPV基因组DNA的提取分离,并通过PCR扩增分离出egt基因,插入T载体,转化大肠杆菌,提取重组质粒,酶切鉴定,证实,从SMNPV病毒基因组中克隆到了egt基因,序列测定SeNPV egt基因orf为1572bp,可编码523个氨基酸残基。采用DNAstar软件分析,与7种核多角体病毒及1种颗粒体病毒egt基因的同源性比较显示,SeMNPV egt基因与核多角体病毒egt序列同源性较高,其中与黄地老虎核型多角体病毒(AsNPV)同源性最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为75%和79%。一些与egt结构和功能密切相关的氨基酸是绝对保守的。根据egt氨基酸序列进行分子进化树分析,可将昆虫杆状病毒分成两大类,即核型多角体病毒和颗粒体病毒。该研究为杆状病毒egt基因的遗传改造奠定了理论基础。