SARS冠状病毒E蛋白的表达与纯化

目的研究SARS冠状病毒E蛋白对SARS诊断和预防的价值,利用原核表达系统克隆和表达E蛋白并纯化. 方法采用RT- PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码E蛋白的基因;经克隆和测序分析后,亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR和双酶切鉴定;阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,进一步以SARS病人血清进行免疫印迹分析;大量诱导表达E蛋白,亲和层析予以纯化. 结果 RT-PCR扩增出E蛋白基因的特异片段,获得的阳性克隆序列与Gen Bank中登录的SARS冠状病毒的E蛋白基因序列同源性为100%;E蛋白基因被亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,在BL21中获得表达, 表达产物能被SARS病人血清识别.表达的E蛋白经亲和层析获得纯化. 结论成功构建了SARS冠状病毒E蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中表达的E蛋白的融合蛋白具免疫活性.