小腿肌肉移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡的疗效观察

目的评价骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)经小腿肌肉移植对大鼠糖尿病足溃疡(DFUs)的治疗效果。方法全骨髓贴壁法体外培养雄性Wistar大鼠BM-MSCs至第3代,经4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记。36只雄性Wistar大鼠随机分成A组(BM-MSCs小腿肌肉移植组,n=12)、B组(正常足溃疡对照组,n=12)和C组(DFUs对照组,n=12)。大鼠糖尿病经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导,然后在其双后足背上切取3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成大鼠DFUs模型。于移植后第2、5、8、11天评估各组大鼠的创面愈合率,冰冻切片观察DAPI标记的BM-MSCs在创伤组织中的示踪,肉芽组织的厚度采用HE染色法检测,CD31和Ki-67的表达采用免疫组化法检测,血管内皮细胞生长因子(VEGF)在创伤组织中的表达水平采用ELISA和RT-PCR检测。结果 B组的创面愈合最快(P<0.05),第8、11天A组的创面愈合率高于C组(P<0.05)。冰冻切片发现A组荧光强度和区域在第5天时达到高峰。HE染色结果显示第5天A、B两组的肉芽组织厚度相同,但比C组厚。CD31和Ki-67的免疫组化发现A、B两组的平均阳性小血管数和细胞数无差异,但与C组相比有差异(P<0.05)。ELISA和RT-PCR结果均显示,第11天A组的VEGF表达水平明显较对照组高(P<0.001)。结论 BM-MSCs经小腿肌肉移植能明显促进大鼠DFUs的愈合,这种促愈疗效可能是通过促进创伤组织中VEGF的表达实现的。