产β-葡萄糖苷酶真菌的筛选鉴定、纯化及酶学性质分析

经刚果红平板染色法从土样中筛选到3株产纤维素酶的真菌,通过对其β-葡萄糖苷酶活力的测定,选择一株相对活力较高的菌株进行菌种鉴定.在形态鉴定的基础上,通过内转录间隔区(ITS)序列构建系统发育树初步鉴定为米曲霉(Aspergillus oryzae),命名为giF-10.对米曲霉giF-1O进行摇瓶发酵,经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析进行纯化.得到纯化后的β-葡萄糖苷酶,比活力为40.84U/mg,分子质量约90kD;该β-葡萄糖苷酶最适温度为55℃；在30～50℃之间热稳定性好；最适pH值为4.5; pH4.0～6.0稳定性好；金属离子对酶活力具有一定的影响,Mn2+对酶具有较强的激活作用:Fe3+和Cu2+对β-葡萄糖苷酶活力有较强的抑制作用；该酶对水杨素和纤维二糖具有较强的底物特异性；β-葡萄糖苷酶对水杨素的动力学参数:Km为0.676mmol/L；对纤维二糖的动力学参数为:Km为2.906mmol/L.