大白菜、青花菜和叶用芥菜体细胞杂交种形态学与细胞学特性鉴定

为拓宽十字花科蔬菜育种种质资源,以大白菜(Brassica campestris L.ssp.pekinensis)、青花菜(B.oleracea L.var.varitalica)和叶用芥菜(B.junceaL.Czern)的子叶、下胚轴为材料,分离、纯化原生质体,采用40%聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)融合法进行原生质体融合。融合细胞在附加0.2mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA+0.1mg·L-1激动素(kinetin)的改良K8p培养基中液体培养,当细胞分裂至8~10细胞期时,将分裂的细胞包埋于0.15%琼脂糖,然后在添加0.3mol·L-1蔗糖和2mg·L-16-BA+2mg·L-1玉米素(zeatin)+1mg·L-1NAA+0.5mg·L-1kinetin的Kao培养基中诱导愈伤组织。将培养获得的936个愈伤组织转到3种不定芽诱导培养基MS+5mg·L-1zeatin+2mg·L-1IAA;MS+2mg·L-1zeatin+2mg·L-1IAA;MS+0.5mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA上诱导芽分化,当芽长3cm左右时,转到1/2MS+0.2mg·L-1NAA的生根培养基上诱导生根,共获得了96株再生植株,对其进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。形态学观察显示再生植株表型变化大,包括3个亲本的中间型或两个亲本的中间型;PCR技术鉴定结果显示96株杂种植株中93株为细胞质雄性不育特性;染色体计数显示,再生的植株染色体数变化范围广(2n=38~64),但未发现染色体数总和与3种融合亲本染色体数总数(2n=74)相一致的个体。基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)和扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析结果表明,再生植株基因组中分别检测出大白菜、青花菜、叶用芥菜的DNA片段,证实了大白菜、青花菜、叶用芥菜种间体细胞杂交种的真实性。