牛小肠碱性磷酸酶部分性质研究

用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、EAE-32柱层析和Sephadex G-150凝胶过滤,从牛小肠中分离纯化出牛小肠碱性磷酸酶(BIAP).提纯倍数为50.69,比活力为48.87U/mg蛋白.酶液经SDS-PAGE呈现单一条带,且不含DNA核酸酶.该酶催化对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)水解反应的最适pH值为9.7,pH小于6.5大于11.5均不稳定;最适温度为45℃,高于50℃不稳定.45℃,pH 9.7时K_m值为0.29mmol/L,最大反应速度(V_(max))为4.6μmol/(L·min).利用SDS-PAGE测定酶亚基的分子量为66 kD.Mg~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶有不同程度的激活作用,Zn~(2+)和EDTA对酶有抑制作用.随着Mg~(2+)、Zn~(2+)和EDTA浓度增加,270nm处紫外吸收值增加.