链霉菌UDP-葡萄糖脱氢酸编码基因Ste6的克隆表达和性质研究(英文)

链霉菌139能够产生一种全新的胞外多糖——依博素(139A),该多糖体内具有显著抗类风湿性关节炎活性。其生物合成基因簇(GenBankAccessionNumber:AY131229)已被鉴定约31·3kb,包含22个开放阅读框(ste1~ste22)。以pET-30a为载体,克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了ste6基因的表达,对该基因的克隆、表达与性质进行了研究。亲和层析法证实,纯化后重组蛋白具有催化UDP-葡萄糖脱氢变成UDP-葡萄糖醛酸的活性。这表明ste6编码产物是葡萄糖脱氢酶。为了证实ste6基因与依博素生物合成的关系,采用单交换基因破坏策略构建了ste6基因阻断突变株。结果初步显示ste6和依博素生物合成相关。