鼠疫耶尔森氏菌rV270抗原的克隆、表达及其免疫保护作用评价

目的:为研制鼠疫亚单位疫苗,克隆、表达并纯化去除产生免疫抑制作用序列后的鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原(rV270)。方法:依据已知的LcrV的核苷酸序列,避开其产生免疫抑制作用的区段设计引物,扩增rV270基因并克隆到pET24a载体中,在大肠杆菌BL21中表达His-rV270融合蛋白;表达产物先后经Co2+亲和层析和Sephacryl S-200 HR凝胶柱纯化,并在纯化过程中应用凝血酶切除His标签;氢氧化铝佐剂吸附重组抗原后免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第21天加强免疫1次,第5周使用104CFU鼠疫菌141强毒株攻毒,测定其免疫保护作用。结果:rV270以可溶性方式表达;应用Co2+亲和层析柱和Sephacryl S-200 HR凝胶柱结合凝血蛋白酶切除His标签的方法可得到不含标签的较高纯度的重组蛋白;攻毒实验中实验组小鼠全部存活,而对照组全部死亡。结论:获得了具有良好免疫保护作用的rV270蛋白,可用于鼠疫亚单位疫苗的研究。